测序用引物说明

  • 提供引物的序列,交由我们合成,需另行收费
  • 自备引物时,请提供浓度(浓度必须正确)大于5 pmol/μl的引物10 μl以上,并注明引物序列
  • 注意引物长度宜在20个碱基左右,GC含量在50~60%左右。不要使用含有Mix碱基的引物,特别是3'端的3个碱基内不能含有Mix碱基
  • 引物必须经过PAGE纯化,纯度大于90%
    表1. 常用载体及相关通用引物
    Vector
    Primer(F)
    Primer(R)
    PMD18/19/20-T(非NdeI酶切) M13F(-47) M13R(-48)
    PMD18/19/20-T(NdeI酶切) M13F(-75) M13R(-48)
    PUC18/19/57(非NdeI酶切) M13F(-47) M13R(-48)
    PUC18/19/57(NdeI酶切) M13F(-75) M13R(-48)
    pEASY-T M13F/T7 M13R
    pUcm-T M13F/T7 M13R
    pCR2.1-TOPO M13F/T7 M13R
    pGEM-T(-Easy) M13F/T7 SP6/M13R
    pBS-T M13F/T7 T3/M13R
    pET-*(His)(KAN+) T7 T7 Ter
    pET22(a,b,c)(AMP+) T7 T7 Ter
    pET28,30,24,29(KAN+) T7 T7 Ter
    pET32(a,b,c)(AMP+) S.tag T7 Ter
    pET39/40/41/42(kan+) S.tag T7ter
    pET48/49/50(kan+) / T7ter
    pEASY-E1(AMP+) T7 T7ter
    pGEX系列 pGEX-5' pGEX-3'
    pTrcHis M13R(-48) pBV220R
    pcDNA3.0/3.1/4/6 CMV-F/pEGFP-N5'/T7 BGH
    pcDNA3.3 CMV-F/-N-5 TK-polyA
    pBluescript SK/KS(+/-) M13F/T7 T3/M13R
    pGCSilencer-U6/Neo/DsRed U6-5' /
    p3xflag-cmv-10 CMV-F CMV-24
    pCMV-Sport M13F/T7 SP6/M13R
    pCMV-Tag(KAN+) T3 T7
    pFlag-cmv pEGFP-N-5'/CMV-30 CMV-24
    pEG/Y/CFP-N(KAN+) pEGFP-N-5’ pEGFP-N-3’
    pEG/Y/CFP-C(KAN+) pEGFP-C-5’ pEGFP-C-3’
    pIRES2-EGFP(KAN+) pEGFP-N-5' pIRES2-EGFP-R
    pPIC9K 5’AOX/a-factor 3’AOX
    pPIC3.5K 5'AOX 3'AOX
    pPICZaA/B/C 5’AOX/a-factor 3'AOX
    pGADT7 AD T7 3'AD
    pGAPZa-A/B/C a-factor 3'AOX
    pGBKT7(KAN+) T7 3'BD/M13R
    pACT T7 T3
    pCAMBIA1301/1302/1303/1390/1391 M13R(-48)/M13R M13F/M13F(-47)
    pBI101/121(KAN+) M13R(-48)/M13R /
    psilencer4.1-cmv neo M13F(-47)/M13F pEGFP-N-5'
    pGL3-Basic/Control(非XbaI) RVP3 GLP2
    pGL3-Basic/Control(XbaI) pGL3-XbaI-F RVP4
    pGL3-Control RVP3 GLP2
    pGL2 GLP1 GLP2
    pGL4.10 RVP3 pGL4-R(设计)
    pDSRED-N1(KAN+) pEGFP-N-5' pDSRED-N1-R
    pDsRED1-C1 pDsRED-ex-C1-F? pDsRED-R
    PRK5 SP6 PRK5-R
    pCMV-3Tag-3A CMV-F T7
    PCMV-HA PCMV-F M13R
    PCMV5 CMV5F CMV5R
    pcold-TF pcold-F pcold-R
    PQE30 PQE30-F PQE30-R

注:(1) 选择测序通用引物时,以距离插入位点约50 base 为佳
        (2) 在使用商业化载体时,建议使用载体推荐测序引物

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