样品提供说明

菌液:

请您最好提供200μl以上新鲜菌液,装在1.5 ml离心管中并用封口膜封好交给我们的工作人员或快递邮寄,或者提供4ml新鲜菌液,我们可直接进行质粒的提取。

我们的常规培养基为LB,培养温度为37℃,常规抗生素为氨卞青霉素、卡那霉素、氯霉素。您的样品如果需要特殊培养要求,请您提供4ml新鲜菌液;如果使用特殊抗生素,请您一定提供储存液并告知浓度以及工作浓度。

平板菌、穿刺菌或者甘油菌:

若您提供平板菌,穿刺菌或甘油菌,请注明培养条件。我们的常规培养基为LB,培养温度为37℃,常规抗生素为氨卞青霉素、卡那霉素、氯霉素。如您的样品需特殊培养要求,请您提供4ml新鲜菌液;如果使用特殊抗生素,请您一定提供储存液并告知浓度以及工作浓度。提供的平板请用封口膜将其封好交给我们的工作人员,如快递邮寄,请做好缓冲处理,以避免在运输过程中可能出现的损坏。

另外请确保您提供的菌种的准确性,如因菌种自身问题引起的任何测序结果误差,我们将收取全额的测序费用。

质粒:

如果您的质粒纯度可以达到全自动测序的要求,即:OD260/OD280=1.6~2.0,也可以直接提供质粒。要求浓度>200ng/μl,提供10μl 以上。

我们的常规培养基为LB,培养温度为37℃,常规抗生素为氨卞青霉素、卡那霉素、氯霉素。您的样品如果需要特殊培养要求,请您提供4ml新鲜菌液;如果使用特殊抗生素,请您一定提供储存液并告知浓度以及工作浓度。除此之外,您还可以提供平板菌、穿刺菌或者甘油菌。以下情况请您直接提供抽提好的DNA模板:

  • 噬菌体DNA
  • 低拷贝质粒
  • cosmid,BAC DNA

请您纯化DNA模板时注意:纯化的DNA模板要求纯度高。纯化以后的DNA模板要溶解于无菌去离子水。浓度要求>200ng/μl,(载体较大的,请提供>500ng/μl),提供10μl以上(一般情况下,经测序部检测合格后才可使用)。

无论您按照1或2提供菌液或质粒,请您务必写明:
  • 质粒的名称和详细图谱
  • 插入片段的大小和酶切位点
  • 选取的测序引物名称和序列,并且标明测序引物距离插入片段的位置(注:测序引物以后可能会有20~30个碱基不明晰)
  • 如果提供特殊测序引物,请写明序列,并且一定要提供经PAGE纯化的引物,浓度大于5pmol/μl

PCR产物:

如果您提供的是PCR原液,我们将进行琼脂糖凝胶电泳纯化。回收后的产物无论测序成功与否,我们将收取一定的纯化费用,所以请您提供PCR原液时一定要进行鉴定。确信PCR产物为单一扩增条带,总量必须大于2μg,方可提供,以免耽搁您的实验。

如果您提供纯化好的PCR产物,条带必须单一,纯度OD260/OD280=1.6~2.0。最好溶解在已灭菌的去离子水中,浓度要求>50 ng/μl,提供10μl以上。同时请您提供PCR引物,并注明浓度,一定要提供经PAGE纯化的引物,浓度大于5pmol/μl。

注意事项:
  • PCR产物直接测序成功的关键是PCR产物的纯度,所以我们提倡切胶回收PCR产物。如果有几条PCR产物长度相近,用电泳胶也无法分开,此时的PCR产物便无法直接测序。这种情况建议把PCR产物克隆后测序。
  • PCR产物直接测序成功的另一要因是引物,不是能做PCR反应的引物便能测序。测序用引物要求较高,引物的3’端必须与模板完全匹配,含有Mix碱基的引物一般不能测序(特别是3’端)。此外,测序引物长度一般为20个碱基左右,GC含量必须在50~60%左右。而且用于测序的引物一定要经过PAGE纯化,纯度必须大于90%。
  • 在PCR扩增时,难以扩增(扩增后的PCR带较弱)的PCR产物在测序时一般成功率较低。
  • 小于150bp的PCR产物直接测序效果不好,建议克隆后测序。

注:以下电泳图片均为2微升上样量。

  1. PCR未纯化产物,如下图:
DNA测序
  1. PCR纯化产物,如下图:
DNA测序
  1. 质粒,如下图:
DNA测序

Cosmid中插入DNA片段的测序:

请提供至少5 μg纯化后的Cosmid DNA(因每个反应的用量需1 μg以上),并注明浓度。同时提供浓度大于5 pmol/μl的引物10 μl以上(浓度必须正确)。

其它说明:

客户在提供测序样品的同时,请注明用何种引物,测几个反应,是否测通,是单链测序还是双链测序等。

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