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多肽合成FAQ

Q1:金斯瑞多肽合成的优势有哪些?

A1:金斯瑞始终以优惠的价格提供高质量的多肽合成服务,FlexPeptideTM技术最长可合成长达200aa的多肽,创造了该技术的世界记录。同时,金斯瑞多肽合成周期短,服务周到。

Q2:金斯瑞可以合成哪些类型的多肽?

A2:金斯瑞可提供常规多肽、修饰肽、多肽文库、cGMP多肽、重组肽及化妆品肽等。除此之外,金斯瑞还提供大规模多肽合成服务,如克级肽。

Q3:金斯瑞合成多肽的长度、纯度及规模如何?

A3:通常,金斯瑞多肽合成可以缩合2~200个氨基酸序列;纯度范围可从粗品级~98℅纯度范围;合成规格可从mg~kg级。

Q4:多肽合成的具体方向是什么?

A4:多肽合成是从多肽的C端向N端开始合成。

Q5:多肽纯化用的是什么方法?

A5:金斯瑞多肽纯化采用HPLC,半制备纯化柱法。

Q6:粗提或纯化后多肽的杂质是什么?

A6:粗提或纯化后,多肽的杂质包括:盐、水分及氨基酸残基、痕量的有机溶剂等。

Q7:金斯瑞提供的数据报告包括哪些?

A7:金斯瑞提供HPLC、MS及COA文件,其中质量控制数据包括纯度、合成量、MW及外观等。同时我们还提供免费的多肽溶解测试数据。

Q8:什么是多肽纯度?

A8:金斯瑞目录多肽纯度一般是95%,这表示交付到您手里的冻干粉中,多肽净含量(不是多肽总重)的95%是您的目标多肽。产品中多肽净含量的另外5%是缺失序列,纯化过程中被一起带入到了产品中。多肽合成的过程中,因为某些氨基酸位点缩合效率略低,导致缩合不完全,所以就产生了缺失序列。一般情况下我们用反相HPLC来定义多肽纯化。

Q9:金斯瑞合成多肽的纯度能达到多少?我的实验需要多少纯度?

A9:金斯瑞可提供不同纯度级别的多肽供您选择,从粗品到98%纯度。根据您的实验需要,即多肽的特定用途,您可以做出纯度选择。这里提供几条选择多肽纯度的建议。

纯度
应用
>85%
用于免疫学应用和多克隆抗体的生产
>90%
用于SAR研究和生物检测
>95%
用于体外生物检测,例如ELISA,酶学,生物活性
>98%
用于NMR,晶体结构研究及敏感的生物检测

Q10:什么是多肽净含量?

A10:理解多肽净含量和多肽总重的区别是非常重要的。交付到您手上的多肽冻干粉不仅仅包含多肽,同时包含一些其它物质例如水,被多肽吸收的溶剂,反荷离子和盐。多肽总重是指所有这些混合物的重量。多肽净含量是指您样品中多肽的实际重量。多肽净含量通常占总肽总重(也称为多肽毛重)的50-80%,一般是通过氨基酸组成分析或者N元素分析计算获得的。多肽净含量不要与多肽纯度相混淆,多肽纯度是指目标多肽占您样品中多肽的百分比。

Q11:如何计算理论多肽净含量?

A11:假设交付到您手中的多肽产品中反荷离子是唯一的非多肽杂质,理论多肽净含量可以通过以下方式估算,我们将多肽的分子量分为两部分,一部分是多肽,一部分是中和多肽的三氟醋酸盐反荷离子,反荷离子的分子量以离子数量乘以TFA反荷离子分子量(MW=114)计算。例如,一条合成多肽的分子量是1000,这条多肽有一个游离N端和一个Arg残基,那么理论多肽净含量计算为1000/(1000 + 2 x 114 ) = 1000/1228 =0.81 or 81%。但在实际情况中,多肽样品中的杂质不仅仅是反荷离子,同样包含水、被多肽吸收的溶剂和一些其他物质。这样一来,我们实际的多肽净含量通常是通过定量氨基酸分析获得的。

Q12:多肽文库的应用有哪些?

A12:多肽文库是很多研究的高效工具,这些研究包括GPCR配体筛选,蛋白质相互作用研究,功能蛋白质组学,核苷酸结合,酶作用底物和抑制剂的筛选,抗原和表位筛选,多肽/蛋白质交叉串扰研究,信号分子寻找,以及其他现代药物筛选的重要过程。

Q13:对于磷酸化修饰有什么要求?

A13:合成方向从C端到N端,我们建议磷酸化位点不要远离N端10个氨基酸残基以上,因为从磷酸化的那个氨基酸往后偶联效率逐渐降低。

Q14:在多肽N末端和C末端添加帽子结构有什么好处?

A14:帽子结构能够使得多肽更像一个天然蛋白。N末端可以添加乙酰基,C末端可以添加酰胺基。

Q15:聚乙二醇修饰多肽的优势是什么?

A15:聚乙二醇修饰是通过共价键结合的方式向目标分子添加高分子聚合物(乙二醇)。聚乙二醇修饰通过伪装多肽,骗过宿主细胞的免疫系统,以高效地增强多肽的治疗效果,并增加疏水药物的溶解度和生物利用率。它也可以通过降低肾脏清除率来延长多肽的循环时间。

Q16:多肽的粉末如何保存?

A16:通常,多肽应在密封,低温-20℃长期保存。但对于一些不稳定的多肽,建议不要保存过长时间再使用。

Q17:合成的多肽如何溶解?

A17:一般情况下建议您按照金斯瑞COA文件中说明的溶解条件来进行溶解,具体可参照金斯瑞网站上的 多肽溶解指南

Q18:最合适的溶解多肽的方式是什么?

A18:多肽的溶解度取决于多肽的氨基酸序列和修饰。金斯瑞通过HPLC水和乙腈梯度洗脱的方式纯化多肽。这里提供几条溶解多肽的建议:

  • 超声波可以增加多肽的溶解性
  • 10%的乙酸有助于溶解碱性多肽
  • 10%的碳酸氢铵有助于溶解酸性多肽
  • 对于在水溶液中溶解度极低的多肽,应首先尝试用有机溶剂(例如DMSO,异丙醇,甲醇,乙腈)溶解。一旦多肽全部溶解,逐渐加水稀释到指定浓度。

Q19:金斯瑞多肽合成的周期大约多长?

A19:常规的合成周期为2周,但一般需根据多肽的长度以及合成难度来决定。

Q20:如多肽合成延期,一般是由什么原因导致?合成困难有哪些?纯化困难有哪些?

A20:延期原因:

  • 序列困难,多次尝试
  • 原料采购时间耽误
  • 抗原订单巯基检测不合格,重新处理
  • 订单或者样品信息沟通

合成困难:

  • 氨基酸缩合困难
  • 修饰困难
  • 保护基难脱除

纯化困难:

  • 等电点低,制备色谱中出峰不规则,难洗脱
  • 序列疏水,样品在色谱柱中保留时间过长,无法有效洗脱
  • 订单序列不稳定,纯化过程中样品易变质,且不易控制

Q21:交付的多肽肉眼看不到,是什么原因?

A21:原因可能如下:

  • 客户要求每管的分装量太少,样品粘在管壁上,通过肉眼无法观察出来;
  • 客户复测的时候可能是将样品从管中导出来复称,但是管壁上会有部分样品粘附,导致客户复称的量偏少;
  • 不同批次之间的多肽性状也可能存在差异,不一定是9 mg的样品看上去就比4 mg的多;
  • 多肽亲水性导致保存或者运输过程中吸潮。

Q22:如最终交付的多肽合成量达不到客户的要求,可能是什么原因造成?

A22:原因可能如下:

  • 客户复测纯度所采用的检测手段和金斯瑞的检测手段不一致,而不同的检测手段结果会有一定出入;
  • 检测手段一致,但是不同仪器和不同的检测试剂检测出来的结果也会有一定的差别;
  • 多肽序列不稳定,在运输和保存过程中发生变化。

Q23:金斯瑞合成的多肽能否保证活性?如果要求多肽保证活性,金斯瑞如何处理?

A23:金斯瑞不保证合成多肽的活性。如有文献证明客户所需合成的多肽是有活性的,建议可由金斯瑞做活性检测。

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