酵母蛋白表达服务

金斯瑞酵母蛋白表达系统结合了原核和真核蛋白表达系统的优点,是大规模生产重组真核蛋白的最佳模式。我们的酵母蛋白表达系统集高产量、高效和类似哺乳动物表达系统的特点为一体,蛋白表达持久、稳定。金斯瑞可制备与哺乳细胞系统性质相同的表达蛋白,利用基因改造型酵母使表达的蛋白糖基化,表达的蛋白在人体治疗中具有很强的适应性。此外,该表达系统可稳定的表达那些在其它表达系统中无法表达的蛋白。

另外,作为中国最大的基因合成供应商,金斯瑞根据Pichia pastoris,Saccharomyces cerevisiae及其它酵母菌株的密码子偏爱性,免费提供给您最佳高级密码子。您还可以免费使用我们的稀有密码子分析软件,测试您的基因序列是否理想,是否需要优化,以提高您的目的蛋白表达水平。

酵母表达蛋白的应用:

  • 真核蛋白分析
  • 核磁共振法研究同位素标记蛋白
  • 检测筛选
  • 结构生物学研究
  • 动物饲料生产
  • 环境工程
  •    YeastHIGHTM 蛋白表达套餐   
  • 标准蛋白表达套餐
  • 示例
  • 优势
YeastHIGHTM蛋白表达套餐 (SC1346)

金斯瑞engineering-enhanced蛋白表达技术,可将大部分的重组蛋白表达成功率提高至90%以上,专利的YeastHIGHTM 技术能更高的提升表达率。很多原核表达的分泌型蛋白会出现不溶,或包涵体无活性等情况,选择酵母表达系统则可避免这些问题,成功表达蛋白。

主要步骤 特点 交付内容 交付时间
1.亚克隆
  • 亚克隆至两个适当的表达载体中
  • 制备大量质粒
  • 构建线性化载体
  • 载体构建报告
  • 2周
2.表达优化及评估
  • 将线性载体转化至适合的寄主菌株中
  • 通过PCR方法确定阳性转化株
  • 表达优化及确认
    • YeastFast技术帮助插入复杂基因片段,转化筛选
    • 确定培养基及诱导浓度
    • SDS-PAGE以及Western blot分析
  • 表达报告
  • 3–5周
3.蛋白表达及纯化
  • 1L系统中少量表达
  • 一步法纯化,或附加纯化至纯度最低可达90%
  • 已纯化可溶性蛋白
    QC 文件
  • 2周
4.大规模蛋白制备及纯化 (可选择)
  • 高达500L的大规模表达(使用发酵桶以及TFF大规模过滤系统)
  • 交付的蛋白纯度高达90%及以上
  • 标签去除
  • 酵母胞浆/已纯化的蛋白
    QC文件
  • 2–3周
标准蛋白表达套餐(SC1257)

金斯瑞可提供给客户标准的酵母表达套餐,该套餐可适当修改,以满足客户的需求。

重要步骤 特点 交付内容 交付时间
1.亚克隆
  • 亚克隆至适当的表达载体
  • 制备大量质粒
  • 构建线性化载体
  • 载体构建报告
  • 2周
2.表达及评估
  • 将构建好的线性化载体转入合适的寄主菌株中
  • 通过PCR方法确定阳性转化株
  • 表达确认
  • SDS-PAGE以及Western blot分析
  • 表达资料
  • 2周
3.少量表达及纯化
  • 1L酵母培养物表达
  • 一步法纯化,或附加纯化至纯度最低可达90%
  • 已纯化的蛋白
    QC报告
  • 2周
4.大规模蛋白制备及纯化 (可选择)
  • 高达500L的大规模表达(使用发酵桶以及TFF大规模过滤系统)
  • 交付的蛋白纯度高达90%及以上
  • 标签去除
  • 酵母胞浆/已纯化的蛋白
    QC报告
  • 2–3周

*注:表中的交付时间是金斯瑞标准服务交付时间,如果您还需要额外的服务,可能需适当延长服务时间。

1.酵母系统表达蛋白

金斯瑞YeastHIGHTM 表达系统以及YeastFast技术在分泌表达方面具有很强的优势。下图所示为使用金斯瑞YeastHIGHTM 表达技术表达一种酶。SP-Sepharose一步法纯化后,产生了表达水平约20mg/L的无标签蛋白,且纯度高于90%。金斯瑞将通过MALDI-TOF方法进一步检测目标蛋白。

Fig. A: Expression and secretion of target protein from P.pastoris
         Lane 1 : Conventinal yeast expression technology
         Lane 2 : GenScript YeastHIGHTM technology
         Lane 3 : Negative control
         Fig.B: Purification of the target protein by SP-Sepharose
         Lane M: Smart Protein Standard (GenScript, Cat. No. MM0900)

2.信号肽

下图所示为一种信号肽蛋白酶的表达情况。使用Saccharomyces cerevisiaeα factor prepro peptide(α因子前体肽原)表达,无法表达目的蛋白。然而,将α因子前体肽原序列更换为蛋白酶信号肽自身序列时,酵母成功分泌了目的蛋白,目的蛋白正确表达。

Fig.A: Western blot analysis of target protein expression with native signal peptide
           Lane 1-5: Induced for 24 h, 48 h, 72 h, 84 h, 120 h
           Fig.B: Western blot analysis of target protein expression with α factor prepro peptide
           Lane 1-4: Induced for 24 h, 48 h, 72 h, 84h
           Lane M: Protein Marker

1. YeastHIGHTM Technology技术:

金斯瑞YeastHIGHTM技术是酵母表达的最强的优势,包括启动子,最佳的载体细胞,可诱导性,信号肽以及细胞定位,是我们能提供客户高水平的重组蛋白制备的最佳保障。在我们提供酵母蛋白表达服务的这些年,我们已成功表达了数百种蛋白,包括酶,蛋白酶,激酶,细胞因子,受体,及转录因子等。

2. OptimumGeneTM 密码子优化技术提高表达水平:

金斯瑞先进的OptimumGeneTM 密码子优化技术能优化您的基因序列,有效提高表达水平和蛋白溶解性。OptimumGeneTM 运算法则可优化与转录,翻译以及蛋白折叠复性相关的很多参数。    More…

3.大规模蛋白制备

金斯瑞发酵设备提供给您高质量的蛋白制备,最高可提供500L。我们的TFF大规模过滤系统能够有效提高蛋白纯度以及产量。

4.纯化

金斯瑞为您提供灵活多样的纯化系统:亲和柱、凝胶过滤、离子交换、HIC(疏水相互作用色谱法)以及HPLC。蛋白中插入各种不同的标签,以促进纯化,实验结束后,金斯瑞同样提供您标签去除服务。

5.价格实惠

复杂的酵母表达系统价格优惠,极具竞争性,金斯瑞帮您有效节省实验经费。

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