质粒纯化试剂盒

随着QuickClean 5M 质粒小抽试剂盒的停产和升级,金斯瑞QuickClean II 质粒小抽试剂盒更适用于分子生物级别质粒DNA的快速小规模纯化,仅需1-5 ml过夜培养的菌液即可抽提高达20 μg的质粒DNA,不含RNA、蛋白以及其他污染物。QuickClean II 质粒小抽试剂盒采用经优化过的试剂和高品质的离心柱来减少样品上样及按常规实验步骤提取高纯度质粒DNA的时间,包括PCR、克隆、体外翻译、限制性酶切和DNA转化。

主要特色

  • 高纯度——可去除90%以上的污染物和抑制剂;
  • 高容量——纯化柱可结合高达20 μg的质粒DNA;
  • 高回收率——质粒DNA的回收率高于99%。
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产品 QuickClean II 质粒小抽试剂盒 QuickClean 5M 质粒小抽试剂盒(已停产)
反应 50次
250次
100次
应用 转化、克隆、限制性酶切以及测序等
质粒类型 高/低拷贝、粘性末端DNA
内毒素终浓度 10,000 EU/ml
每次可提取的样品数 1
每次所需时间 <15 min <15 min
产量 高达 20μg
回收率 高达99% 50% - 90%
内毒素终浓度 10,000 EU/ml 10,000 EU/ml
DNA纯度(来自细菌培养液) OD260/OD280≈ 1.763-1.9 OD260/OD280≈ 1.656-1.9

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L00420-100
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图1. 使用QuickClean II质粒小抽试剂盒从E. coli培养液中提取高拷贝质粒DNA并与A公司相对比;提取时均严格依据试剂盒所提供的方法进行,结果如图所示:
Small-scale Purification

图示
M1: DL15,000 DNA Marker (Takara)
泳道 1-3: 使用金斯瑞QuickClean II质粒小抽试剂盒提取的质粒
泳道 4-6: 使用A公司试剂盒提取的质粒

图2. 酶切反应分析,使用QuickClean II质粒小抽试剂盒从E. coli培养液中提取质粒DNA并使用不同的内切酶进行酶切,结果如图所示:
Small-scale Purification

图示
M1: DL2,000™ DNA Marker (Takara)
M2: DL15,000 DNA Marker (Takara)
泳道1: 质粒阳性对照
泳道2 - 9: Hind III, Hac III, Dra I, Kpn I, BamH I, Hinf I, Xho I, EcoR I 酶切后的质粒

1. 为什么质粒DNA产量低?
A: (1) 检查细菌培养是否正确;
(2) 细菌细胞是否完全重悬;
(3) 将流出缓冲液置于30-60°C。

2. QuickClean II 质粒小抽试剂盒是否可用于从哺乳动物细胞中提取质粒DNA?
A:不可以。该试剂盒仅用于从过夜培养的大肠杆菌菌液中快速、简单、高效地小规模提取质粒DNA。

3. 该质粒小抽试剂盒最适用于什么培养基?
A:LB培养基。

4. 如何判断质粒是高拷贝还是低拷贝质粒?
A:您可从载体名字进行区分。例如,PUC载体系列为高拷贝质粒。

5. 为什么纯化的质粒中有基因组DNA?
A:如果制备时有基因组DNA,请在加入裂解液后轻轻翻转试管或离心管。

6. 是否可以使用QuickClean II试剂盒制备低拷贝质粒或黏粒?
A:此试剂盒可以纯化低拷贝质粒,但是不能制备黏粒。

7. 在不同质粒抽提试剂盒中缓冲液的名字是一样的吗?
A:是的。金斯瑞试剂盒中都使用相同名称的缓冲液,其化学组分完全一致,可以在不同试剂盒中通用。例如,质粒小抽试剂盒中的洗涤缓冲液和流出缓冲液和PCR胶回收试剂盒的缓冲液是一样的。

9. QuickClean II PCR纯化试剂盒可以去除RT-PCR中的荧光染料吗?
A:可以。QuickClean II PCR纯化试剂盒可以有效去除RT-PCR中的SYBR Green染料,也可以去除标记dNTP的荧光染料,例如Cy3-dUTP等等。

10. 是否有必要重复洗涤步骤?
A:从柱子上流出的DNA纯度已经足够用于下游实验,若下游实验对盐含量比较敏感,则建议在洗脱前对柱子进行两次重复洗涤。

11. 是否可以使用TE缓冲液洗脱质粒?
A: 试剂盒中的流出缓冲液为2.5 mM Tris-HCl pH 8.5,TE缓冲液或去离子水也可以使用,但产率会有一定下降。流出缓冲液的pH值非常关键,高pH值利于提高质粒从柱子上的洗脱效率,例如pH 8.5。

12. 需要准备哪些额外的消耗品?
A:您需额外准备乙醇,用于三种试剂盒的洗涤缓冲液。

13. 是否可以使用TAE缓冲液洗脱?
A:可以。QuickClean II PCR纯化或胶回收试剂盒可以使用TBE或TAE缓冲液。

14. PCR抽提或胶回收试剂盒是否适用于低熔点琼脂糖凝胶?
A:可以。QuickClean II PCR纯化或胶回收试剂盒适用于低熔点琼脂糖凝胶。

相关产品订购信息
产品编号
名称
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D0056
1 ml
¥90
E00007-1000
1000 U (1000.0U/vial)
¥140
E00007-50000
50000 U (1000.0U/vial)
¥3500
E00012
2500 U (2500.0U/vial)
¥1200
E00043
1000 U (1000.0U/vial)
¥450
E00019
100 Reactions
¥120
L00418-100
100 rxns
¥850
L00418-50
50 rxns
¥450
L00339
24 rxns
¥1750
L00342
1 kit
¥600
L00419-100
100 rxns
¥850
L00419-50
50 rxns
¥450
M102O-100
500 μl(500.0μl/vial)
¥150
M102O-500
2500 μl(500.0μl/vial)
¥500
M102R-100
500 μl(500.0μl/vial)
¥150
M102R-500
2500 μl(500.0μl/vial)
¥500
M106O-100
500 μl(500.0μl/vial)
¥100
M106O-500
2500 μl(500.0μl/vial)
¥350
SD1162
50 ug
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50 ug
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