scFv是由抗体重链可变区和轻链可变区通过15-20个氨基酸的短肽连接而成，属于小分子基因工程抗体。scFv保留了完整抗原活性，且具有穿透力强、体内半衰期短、免疫原性低、可在原核细胞系统表达以及易于进行基因工程操作等优点，在医学和生物技术领域中有着广泛的应用，这些应用包括细胞治疗、疾病诊断、药物递送等。金斯瑞开发了一系列高质量的Anti-scFv抗体，助力您在基于scFv的抗体药、双特异性抗体及CAR-T等领域的研究。
图1：全长抗体及scFv结构图
MonoRab™兔单抗技术保证对scFv的高亲和力Kd＜10-9 M；
在较低滴度下可通过流式细胞术准确检测CAR-T细胞阳性率；可检测到溶液中较低含量的scFv；
重组生产的单克隆抗体保证最优的批间差；
对未转染CAR的T细胞、不表达scFv的细胞表现出极低的非特异性信号；
结合scFv后，不影响scFv对其靶抗原的结合；
金斯瑞的Anti-scFv抗体对基于scFv的CAR-T细胞表现出超高的特异性。实验结果显示不同稀释比例的Anti-scFv抗体均能准确检测CAR-T细胞的阳性率，且该抗体对未被编辑的T细胞表现出极低的非特异性结合，因此可用于CAR-T细胞的表征。
图2：Anti-scFv抗体表征基于scFv的CAR-T细胞
使用不同稀释比例（1：50-1：500）的MonoRab™ Rabbit Anti-scFv Cocktail [iFluor 647] (GenScript, A02288) 检测相同的CAR-T细胞。MonoRab™ Rabbit IgG Control [iFluor 647] (Whole Molecule), mAb (GenScript, A02026)对CAR-T细胞的染色以及A02288对naïve T细胞的染色作为阴性对照。
流式细胞术结果显示Anti-scFv抗体相比于Protein L和Anti-Fab抗体具有更优的细胞分群效果和更高的检出率。
图3：基于scFv的CAR-T细胞表征工具比较
使用相同浓度的MonoRab™ Rabbit Anti-scFv Cocktail (GenScript, A02282) 、FITC-Labeled Recombinant Protein L 和 Alexa Fluor® 647 AffiniPure Goat Anti-Human IgG, F(ab’)2 检测相同数量和结构的CAR-T细胞。其中，Anti-scFv抗体的荧光信号由Alexa Fluor® 488-Labeled Goat Anti-Rabbit IgG提供。
Anti-scFv抗体可用于检测人源化scFv、鼠源scFv和双特异性抗体对其靶蛋白的结合能力。
图4：Anti-scFv抗体检测scFv/双特异性抗体对其靶抗原的结合曲线
抗原包被浓度为1 μg/mL；scFv浓度从1.37 ng/mL到1000 ng/mL；A02282浓度为1 μg/mL；酶标二抗使用Mouse Anti-Rabbit IgG Fc Antibody (14H9H10) [HRP], mAb(GenScript, A01856)，稀释比例为1：20000。靶点及scFv信息如下：Humanized scFv#1:anti-VEGF scFv; Antigen#1:VEGF; Mouse scFv#2: anti-BCMA scFv; Antigen#2: BCMA; Bispecific Antibody#3: anti-CD19×anti-CD3，BiTE; Antigen#3: CD3.
流式细胞术结果显示Anti-scFv抗体对结合scFv的细胞表现出较高的特异性信号，对未结合scFv的细胞表现出较低的非特异性信号，因此可用于检测scFv对其靶细胞的结合能力。
图5：Anti-scFv抗体检测scFv对其靶细胞的结合活性
使用MonoRab™ Rabbit Anti-scFv Cocktail [FITC](GenScript, A02284)分析anti-CD20抗体对Raji细胞的结合能力。其中蓝色实线代表未染色细胞，红色实线代表仅加入A02284的细胞，绿色实线代表加入anti-CD20 scFv和A02284的细胞。
ELISA结果显示MonoRab™ Rabbit Anti-scFv Cocktail (GenScript, A02282) 可特异性识别不同来源、不同连接顺序（VH-VL或VL-VH）、不同linker的scFv以及不同形式的基于scFv的双特异性抗体，如BiTE, IgG(H)-(scFv)2, (scFv)2-(H)IgG, scFv-Fab-Fc等。
图6：Anti-scFv抗体对不同序列scFv和双特异性抗体的结合曲线
不同来源、不同连接顺序（VH-VL或VL-VH）、不同linker的scFv或不同形式的双特异性抗体以1 μg/mL的浓度包被在酶标板上；A02282浓度从0.017 ng/mL到1000 ng/mL；酶标二抗使用Mouse Anti-Rabbit IgG Fc Antibody (14H9H10) [HRP], mAb(GenScript, A01856)，稀释比例为1：20000。
生物膜干涉技术（BLI）结果显示MonoRab™ Rabbit Anti-scFv Cocktail (GenScript, A02282)对不同来源、不同连接顺序（VH-VL或VL-VH）、不同linker的scFv以及不同形式的基于scFv的双特异性抗体具有较高的亲和力。
图7：BLI检测Anti-scFv抗体对不同序列scFv和双特异性抗体的亲和力
WB结果显示MonoRab™ Rabbit Anti-scFv Cocktail (GenScript, A02282)对不同来源scFv及双特异性抗体BiTE均具有较高的灵敏度。
图8：Western Blot检测Anti-scFv抗体对不同来源scFv和双特异性抗体的灵敏度
MonoRab™ Rabbit Anti-scFv Cocktail (GenScript, A02282)按1：5000稀释，4℃孵育过夜；二抗采用Mouse Anti-Rabbit IgG Fc Antibody (14H9H10)[HRP], mAb (GenScript, A01856)，1：20000稀释，室温孵育1h。
三批次MonoRab™ Rabbit Anti-scFv Cocktail (GenScript, A02282)对scFv表现出一致的结合曲线，各浓度点CV<10%。
图9：ELISA检测MonoRab™ Rabbit Anti-scFv Cocktail的批次稳定性
scFv包被浓度为1 μg/mL；MonoRab™ Rabbit Anti-scFv Cocktail（GenScript, A02282）从111 ng/mL开始进行3倍梯度稀释；检测抗体使用Mouse Anti-Rabbit IgG Fc Antibody (14H9H10) [HRP], mAb (GenScript, A01856)，稀释比例为1：20000。
竞争ELISA结果显示Anti-scFv抗体在与scFv的结合后并不影响scFv对其靶抗原的结合。
图10：Anti-scFv抗体与scFv或双特异性抗体的结合并不影响scFv或双特异性抗体对其靶抗原的结合活性
Antigen #1、Antigen #2和Antigen #3包板后，将A02282与Humanized scFv #1、Mouse scFv #2或Bispecific antibody #3混合后加入孔板中反应，随着A02282浓度的提高，Humanized scFv #1、Mouse scFv #2或Bispecific antibody #3对其靶抗原结合能力并没有显著变化，相比于未加入A02282的变化幅度在80%-120%之间，表明A02282对scFv结合其相应抗原的影响较小。靶点及scFv信息如下： Humanized scFv#1:anti-VEGF scFv; Antigen#1:VEGF; Mouse scFv#2: anti-BCMA scFv; Antigen#2: BCMA; Bispecific Antibody#3: anti-CD19×anti-CD3, BiTE; Antigen#3: CD3.
| 产品编号 | 名称 | 数量 | 价格 | 操作 |
|---|---|---|---|---|
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A02282
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MonoRab™ Rabbit Anti-scFv Cocktail |
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￥3150.00 200 μl |
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A02283
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MonoRab™ Rabbit Anti-scFv Cocktail [Biotin] |
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￥3150.00 200 μl |
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A02284
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MonoRab™ Rabbit Anti-scFv Cocktail [FITC] |
|
￥3150.00 200 μl |
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A02285
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MonoRab™ Rabbit Anti-scFv Cocktail [PE] |
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￥3150.00 200 μl |
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A02286
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MonoRab™ Rabbit Anti-scFv Cocktail [iFluor 488] |
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￥3150.00 200 μl |
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A02287
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MonoRab™ Rabbit Anti-scFv Cocktail [iFluor 555] |
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￥3150.00 200 μl |
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A02288
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MonoRab™ Rabbit Anti-scFv Cocktail [iFluor 647] |
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￥3150.00 200 μl |
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A02289
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MonoRab™ Rabbit Anti-scFv Cocktail [HRP] |
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￥3150.00 200 μl |
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Anti-VHH抗体
| Product Type |
Species Specificity |
Unconjugated | Conjugated | ||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| HRP | Biotin | iFluor 488 |
iFluor 555 |
iFluor 647 |
PE | FITC | |||
| Anti-Camelid VHH, mAb |
Llama, Camel, Alpaca |
A01860 | A01861 | A01995 | A01862 | A01863 | A01994 | A02227 | A02226 |
| Anti-Humanized VHH, mAb |
Humanized, Llama, Camel, Alpaca |
A02165 | A02167 | A02166 | A02168 | A02169 | A02170 | A02171 | A02172 |
| Anti-Camelid VHH, mAb Cocktail |
Llama, Camel, Alpaca |
A02014 | A02016 | A02015 | A02021 | A02020 | A02019 | A02018 | A02017 |
