实验方法：
采用GenCircle™ dsDNA或普通质粒制备转座子，目的基因4kb，采用mRNA形式的转座酶，整合后15天，检测Sleeping Beauty和PiggyBac体系的转座效率
实验结果：
- Sleeping Beauty体系：较之普通质粒，GenCircle™ dsDNA制备转座子的方案下，转座效率提升至4倍，高达52.41%
- PiggyBac体系：较之普通质粒，GenCircle™ dsDNA制备转座子的方案下，转座效率提升至5倍，高达52.04%
常规用于目的基因递送的质粒，载体骨架序列一般＞1.5 kb，且通常含有抗生素抗性基因。抗性基因虽然方便了细菌的筛选与培养，但在基因与细胞治疗等领域，抗性基因残留存在带入体内的风险，导致耐药性上的安全隐患。同时，载体骨架小，则具有毒性更低、免疫原性更低、表达更稳定、转染效率高的优势，进而提升RNA转录水平、蛋白表达水平。
因此，金斯瑞开发了GenCircle™ dsDNA，一种无抗性标记小型环状双链DNA载体合成服务，质粒骨架仅400bp+，去除抗性基因、细菌源序列、 宿主菌株外不会复制。金斯瑞可定制合成包含您目的基因的GenCircle™ dsDNA，提升基因与细胞治疗研究的安全性与效率。
细胞治疗
转座子/转座酶载体
CRISPR基因敲入模板
基因治疗
AAAV/慢病毒包装质粒、
非病毒载体
mRNA制备模板
DNA疫苗研究与开发
抗原表达载体
细胞系/模式动物构建
基因功能研究
转座子/转座酶载体
CRISPR基因敲入模板
去除CpG岛等细菌源序列，表达更稳定
相同质量有效序列多、细胞毒性低、转染效率高
敲入效率提升高达30%、病毒滴度提升高达3倍、转录水平提升高达4倍
| 服务名称 | 级别 | 目的基因长度* | 交付量* | 交付形式 | 周期 # | 应用领域 |
|---|---|---|---|---|---|---|
| GenCircle dsDNA |
HighPure级别 | 1-20kb | 100 μg - g |
冻干粉 / 液体 （缓冲液可选） |
11天起 |
|
| UltraPure级别 | 1 mg - g |
|
# 客户可以选择：1. 在金斯瑞合成基因后构建GenCircle™ dsDNA；2. 客户自己提供已经合成好的含目的基因的质粒直接构建GenCircle™ dsDNA。
* 8kb以上详询技术支持，其他目的基因长度和交付量欢迎详询，邮件发送至oligo@genscript.com.cn或拨打电话400-025-8686转5812或5815，专业技术支持为您服务。
# 此周期不含基因合成周期。
| QC项目 | 标准 | HighPure级别 | UltraPure级别 |
|---|---|---|---|
| 分光光度计 | 交付量保证 | ||
| Sanger测序 | 100%序列正确 | ||
| A260/280 | 1.8-2.0 | ||
| 限制性酶切分析 | 酶切后凝胶电泳分析与预期大小一致 | ||
| 宿主RNA残留AGE分析 | 条带不被检出 | ||
| 宿主DNA残留检测分析 | AGE灰度分析不被检出 (GIS=0) | ||
| qPCR检测分析 (≤5%) | |||
| 质粒超螺旋含量AGE分析 | 超螺旋程度高级别质粒≥90% | ||
| TAL内毒素检测 | ≤0.01EU/μg | ||
| ≤ 0.005 EU/μg | |||
| 微生物限度 | 72小时无生长 | ||
| 全蛋白残留（NanoOrange） | ≤1% | ||
| PH检测 | TE缓冲液：8.00±0.50 ddH2O：（5.00-7.00）±0.50 PBS：7.40±0.50 Tris：7.88±0.50 |
实验方法：
采用GenCircle™ dsDNA或普通质粒制备转座子，目的基因4kb，采用mRNA形式的转座酶，整合后15天，检测Sleeping Beauty和PiggyBac体系的转座效率
实验结果：
实验方法：
采用LNP递送表达luciferase的GenCircle™ dsDNA（GenCircle-CMV-Luc2），DNA剂量为1MPK/test，单次小鼠尾静脉注射后，活体成像仪检测luciferase表达
实验结果：
实验方法：
比较GenCircle™ dsDNA和普通质粒在多种细胞系中的蛋白表达量（LNP递送），通过流式细胞术检测
实验结果：
在HEK293T，H1975，HepG2细胞中，GenCircle™ dsDNA的蛋白表达量均显著高于普通质粒，表达量可高达18倍
实验方法：
使用普通质粒和GenCircle™ dsDNA作为CRISPR基因敲入模板，敲入2.5kb的序列（不含同源臂），检测比较敲入效率
实验结果：
GenCircle™ dsDNA的基因敲入效率可达到普通质粒的4倍，高达35.41%
实验方法：
比较GenCircle™ dsDNA和普通质粒作为AAV包装质粒，传代过程中ITR区域稳定性
实验结果：
GenCircle™ dsDNA服务成功交付全球多个订单，涵盖不同长度的目的基因，包括多个难度项目。
