通过RT-PCR检测mRNA拷贝数

通过荧光强度检测mRNA蛋白表达量

实验方法:
将编码GFP的环状RNA(无修饰)和线性mRNA(100% N1-me-pseU修饰)以同等的mol剂量转染A549细胞,用qPCR检测编码mRNA的丰度,用流式细胞术检测GFP蛋白的荧光强度。
实验结论:72小时后
- 环状RNA的拷贝数是线性mRNA的4倍,稳定性好,降解慢
- 环状RNA的蛋白表达量是线性mRNA的3倍,表达时间长,表达量高
设计灵活,规格多样
高效环化,纯度高
蛋白编码应用:
非编码应用:
QC | 项目 | 检测方式 | 检测标准 | 研究级 - 标准 | 研究级 – 升级 |
---|---|---|---|---|---|
鉴定 | 外观 | 视觉观测 | 澄清无异物 | ||
RNA长度 | Bioanalyzer | 条带位置匹配对应长度 | |||
鉴定 | RNaseR降解测试 | 不会被RNaseR降解 | |||
RNA含量 | UV吸收 | 目标值 ± 5% | |||
PH | PH试纸/PH计 | 目标值 ± 0.5 | |||
缓冲液规格 | 按客户提供详情 | - | |||
纯度 | A260/280 | UV检测 | 1.70 ~ 2.30 | ||
HPLC检测 | HPLC | ≥80% | |||
杂质 | 蛋白质残留 | Nano Orange染料检测 | ≤ 1% | ||
质粒DNA残留 | qPCR | ≤ 0.1% | |||
安全性 | 内毒素 | 半定量 | < 10EU/mg | ||
内毒素 | 定量 | < 10EU/mg | |||
生物负载 | 直接接种 | 72小时内不生长 |
通过RT-PCR检测mRNA拷贝数
通过荧光强度检测mRNA蛋白表达量
实验方法:
将编码GFP的环状RNA(无修饰)和线性mRNA(100% N1-me-pseU修饰)以同等的mol剂量转染A549细胞,用qPCR检测编码mRNA的丰度,用流式细胞术检测GFP蛋白的荧光强度。
实验结论:72小时后
实验方法:
比较线性mRNA,常规环状RNA*,金斯瑞环状RNA(自研技术)三种编码eGFP的mRNA,转染A549细胞后蛋白表达量。
* Wesselhoeft, R.A., Kowalski, P.S. & Anderson, D.G. Engineering circular RNA for potent and stable translation in eukaryotic cells. Nat Commun 9, 2629 (2018)
实验结果:
金斯瑞环状RNA在开始的蛋白表达量和积累的蛋白表达量上,都有更高的表达水平。
实验方法:
比较常规环状RNA*,金斯瑞环状RNA(自研技术)两种编码eGFP的mRNA,转染A549细胞和HEK293T细胞后,通过流式细胞术检测蛋白表达量。
* Wesselhoeft, R.A., Kowalski, P.S. & Anderson, D.G. Engineering circular RNA for potent and stable translation in eukaryotic cells. Nat Commun 9, 2629 (2018)
实验结果:
基于自研技术的金斯瑞环状RNA,在经过HPLC纯化后,在两个细胞上的蛋白表达量均高于常规环状RNA 2-4倍。
实验方法:
将不同mRNA转染A549细胞(InvivoGen),IL6水平检测:Abcam Human IL-6 ELISA Kit,IFN-α水平检测:QUANTI-Luc/Gaussia kit,NF-Kb水平检测:QUANTI-Blue kit。
实验结果:
较之线性mRNA,环状RNA引起的细胞因子上升幅度更低,免疫原性更低。
实验方法:
不同 RNA 形式(线性 mRNA、有痕环状RNA和无痕环状RNA)在不同细胞系中的翻译效率与稳定性比较:HEK293T(人胚胎肾细胞系)及Jurkat(人T淋巴细胞白血病细胞系)。
实验结论:
与有痕环状RNA相比,无痕环状RNA 表达效果更优。在 6 天后仍保持较高水平,明显优于有痕环状RNA和线性 mRNA。
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无痕环状RNA 不含外源序列,免疫原性低更适合体内应用但合成难度大;有痕环状RNA 含有“Scar”序列,合成相对简单,但可能激活免疫系统。
金斯瑞环状RNA采用创新的环化技术和专有的HPLC纯化工艺,确保高水的纯度和环状RNA完整性。
我们提供多种细胞特异性IRES选项,应用场景涵盖基因疗法和功能研究。
相较于常规线性mRNA,环状RNA稳定性更优,具有更持久的蛋白表达,广泛应用于细胞疗法、蛋白替代疗法、疫苗开发、基因编辑、细胞过程调控、免疫调节、生物标志物发现等多个领域。
环状RNA合成周期受序列难度和规格大小影响;从基因合成到环状RNA制备完成,快至3周可以交付。
环状RNA全长一般应小于5kb,ORF序列通常小于4kb。更多定制需求请咨询技术团队。
可以,我们提供基于T4连接酶法构建的非编码型无痕环状RNA,及基于PIE法构建的编码型无痕环状RNA。
我们可以提供如5% m6A等修饰。更多定制需求请咨询技术团队。