GenCRISPR™ gRNA/Cas9质粒

CRISPR gRNA数据库

金斯瑞提供超20,000种含有gRNA序列的plentiCRISPRV2质粒，所有sgRNA序列已经被MIT验证。在数据库中，您可通过搜索基因名称，基因标志或ID来查找相关gRNA。

为满足您多种需求，金斯瑞不仅提供多种Cas9类型的定制质粒，也提供经由MIT验证的空载供您选择。

一、定制质粒类型

根据Cas9类型，定制质粒包含如下几种：

1. 增强CRISPR/SpCas9质粒-eSpCas9^New

特异性增强SpCas9（Enhanced specificity SpCas9，eSpCas9），指的是SpCas9（K848A/K1003A/R1060A），是经过MIT张锋实验室特异性改造的质粒（Slaymaker et al. 2016）.eSpCas9可以降低脱靶效率，比自然SpCas9脱靶效率降低10倍之多，同时可实现基因高效编辑。

Cas9基因组编辑依赖于DNA双链的分离。sgRNA与非靶向DNA序列的不匹配可能导致非特异性结合和分裂。为了提高基因组编辑的特异性，科学家开发了突变为K848A、K1003A和R1060A的eSpCas9。在SpCas9的非靶链沟槽内中和这些带正电荷的残基，既可以减少非靶结合，也可以刺激靶向结合，这一操作需要更严格的Watson-Crick碱基配对。

2. SpCas9质粒^Hot

Cas9内切酶是基因编辑的研究标准。当与单导RNA（single guide RNA，sgRNA）序列结合时，这些酶在基因组中产生位点特异性双链断裂（double strand breaks，DSBs）。

• SpCas9/sgRNAs可以在all-in-one载体中表达，也可以在dual载体中单独表达。
• 优选的靶上SpCas9 PAM序列为NGG。
• SpCas9还包含NGA序列的目标亲和力。

3. SpCas9 Nickase质粒

SpCas9 nickase（Cas9n D10A）包含一个突变，不同于SpCas9切割时形成DSB，SpCas9 nickase在切割序列时形成单链缺口。经过SpCas9 nickase切割后，两个相对的gRNA序列可以有效配对，因为这种方法可以避免不必要的插入。

4. SaCas9质粒

黄色葡萄球菌Cas9同源体（Staphylococcus aureus Cas9 orthologue，SaCas9）是腺相关病毒（adeno-associated virus AAV AAV）应用的理想内切酶。SaCas9比SpCas9大约短1kb，这允许了在AAV组装时更加灵活。AAV载体较低的免疫原性，使SaCas9非常适合于体内编辑的。

• 优选的靶SaCas9 PAM序列为NNGRRT。
• SaCas9对NNGRRN也有很高的亲和性。

5. 转录激活（Transcription Activation，SAM）质粒

CRISPR/Cas9协同激活介质（SAM）系统已被设计用于激活下游目标的转录。SAM系统使用三种不同的激活因子，VP64、P65和HSF1，它们被组装到催化失活的Cas9（dead Cas9，dCas9）复合物上驱动转录。

• SAM复合物由三个组分组成：一个由两个MS2 RNA适配体组成的gRNA、一个催化失活的dCas9-VP64融合蛋白，和一个MS2-p65-hsf1激活因子融合蛋白。
• SAM系统能够激活编码和非编码的元素。
• 查找经由MIT验证的SAM gRNA序列，请前往gRNA数据库。

二、空载服务

为满足您的科研需要，金斯瑞提供空载服务，载体序列已经由MIT验证。这些载体包含一个17bp-1.8kb的可表达连接体，以代替定制的sgRNA序列，您可根据需要对其进行修改。