线性/环状/自扩增mRNA现货产品

金斯瑞提供LNP包封的F-Luc mRNA (m1Ψ) 产品，有助于提升mRNA的递送效率，支持相关研究的开展。

• FLuc mRNA (m1Ψ) - SM102 LNP
• FLuc mRNA (m1Ψ) – ALC0315 LNP

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体内表达验证结果

实验方法：

给Balb-C小鼠静脉注射2种不同LNP制剂包封的Fluc mRNA（100% N1-methyl-pseU 修饰），剂量为0.3mg/kg。通过小鼠全身荧光成像检测Fluc mRNA的表达量和分布。

实验结果：

• 转染后8h和48h，金斯瑞SM102-LNP组递送的Fluc mRNA整体检测到了更高的蛋白表达量
• 转染后48h，金斯瑞SM102-LNP组可检测到更高的Fluc mRNA在肝脏富集的现象
• 静脉注射后3天，SM102-LNP组和MC3-LNP组未见对小鼠体重有显著影响

Cas12a (cpf1) 是一种新型的CRISPR-Cas DNA核酸内切酶，可作为Cas9系统的极大补充，Cas12a系统具有以下优势：

• 拓展编辑位点：Cas12a识别富含胸苷的PAM 序列，能够在具有丰富AT基因组的生物体中进行基因组编辑（例如斑马鱼等）
• 提升编辑效率：Cas12a在序列5’端产生产交错粘性末端，显著增加了细胞选用同源重组修复（HDR）方式的概率，提升基因编辑效率
• 更短的gRNA：Cas12a的crRNA在40-44nt左右（包含一个20nt的恒定区和一个20-24nt的特异性结合区域），化学合成更简单经济

金斯瑞现货mRNA金斯瑞Cpf1/Cas12a mRNA序列源自LbCpf1/Cas12a，具备Cap1结构，提升mRNA翻译效率和表达量，添加100 poly A尾模拟成熟mRNA，更稳定。可针对全序列进行m1Ψ修饰，有效降低免疫原性和细胞毒性。

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先导编辑体系 (Prime editing, PE) 由Cas9-逆转录酶和pegRNA两部分组成，Cas9-逆转录酶会在pegRNA的引导下，精准地切开靶标DNA单链，然后根据pegRNA中的“逆转录模板”，合成含有正确序列的DNA。先导编辑体系的优势在于：不产生DNA双链断裂（DBS），不需要DNA模板就可以实现定向编辑，减少了脱靶率。PE2/PE3 mRNA序列来源于文献：Nelson, et al. Nat Biotechnology, 2022; 40: 402-410

金斯瑞现货mRNA具备Cap1结构，提升mRNA翻译效率和表达量，添加100 poly A尾模拟成熟mRNA，更稳定。可针对全序列进行m1Ψ修饰，有效降低免疫原性和细胞毒性。

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PiggyBac转座子体系分离自粉纹夜蛾细胞系，具有安全、转座效率高、负载容量大（可高达200 kb）、长序列插入效率更高的优点，可用于以非病毒递送的形式，将CAR序列插入T细胞等场景。

金斯瑞现货mRNA具备Cap1结构，提升mRNA翻译效率和表达量，添加100 poly A尾模拟成熟mRNA，更稳定。可针对全序列进行m1Ψ修饰，有效降低免疫原性和细胞毒性。

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Cre是来源于P1噬菌体的重组酶，可以识别催化两个LoxP位点之间发生同源重组，从而造成DNA的缺失、易位等现象，可用于制备诱导型基因剔除小鼠等方向。

金斯瑞现货mRNA具备Cap1结构，提升mRNA翻译效率和表达量，添加100 poly A尾模拟成熟mRNA，更稳定。可针对全序列进行m1Ψ修饰，有效降低免疫原性和细胞毒性。

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疫情期间，SARS-COV2病毒刺突蛋白的序列已被鉴定完毕，金斯瑞Spike mRNA序列源自Moderna新冠疫苗mRNA-1273的序列。

金斯瑞现货mRNA具备Cap1结构，提升mRNA翻译效率和表达量，添加100 poly A尾模拟成熟mRNA，更稳定。可针对全序列进行m1Ψ修饰，有效降低免疫原性和细胞毒性。

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eGFP mRNA可以表达增强绿色荧光蛋白，开放阅读框序列源于水母(Aequorea Victoria)，激发与发射波长 (Ex/Em) 分别为488nm和507nm。常用于mRNA疗法中实验体系或递送体系的优化与验证。

金斯瑞现货环状RNA，具有更好的稳定性，可以更持续的表达蛋白，经实验验证，较之线性mRNA，蛋白表达量更高，免疫原性更低，是环状RNA研究实验体系优化，阳性对照样品的理想选择。

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细胞表达验证结果

实验方法： 96孔板中，每孔加入等摩尔的线性mRNA或环状RNA + lipofectamine2000等转染A549细胞，孵育16-24小时，用酶标仪、流式细胞仪、荧光显微镜或共聚焦显微镜检测eGFP表达，推荐激发波长485nm，发射波长535nm。

实验结果： 通过流式细胞仪检测，比较等摩尔的eGFP环状RNA，eGFP线性mRNA，第1天两者的蛋白表达量接近，第2-3天eGFP环状RNA的蛋白表达量持续增长，可高达到eGFP线性mRNA的约3.5倍。

F-Luc mRNA在递送至细胞或体内后，可以表达萤火虫萤光素酶(firefly luciferase)，加入荧光素底物后，产生黄绿色荧光，检测波长为550-570nm。

金斯瑞现货环状RNA，具有更好的稳定性，可以更持续的表达蛋白，经实验验证，较之线性mRNA，蛋白表达量更高，免疫原性更低，是环状RNA研究实验体系优化，阳性对照样品的理想选择。

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细胞表达验证结果

实验方法： 等摩尔的F-Luc环状RNA和F-Luc线性mRNA ( N1-methyl-pseU ) 采用lipofectamine messengerMax转染A549细胞，24小时后使用荧光素酶检测试剂盒检测。

实验结果： F-Luc环状RNA的蛋白表达量可高达F-Luc线性mRNA的约2倍。

Gluc 环状RNA可表达高斯荧光素蛋白酶（Gluc蛋白酶），约20 kDa，源于海洋桡脚类动物Guassia princeps。当Gluc环状RNA高效递送至细胞或动物体内时， 可表达Gluc蛋白酶，并分泌至细胞培养基或体液中，在底物存在的情况下产生生物发光。具有可分泌，易于监测，灵敏度高，半衰期短，对温度、PH值等耐受性强的优点，可进行细胞或生物体实时监测。

金斯瑞现货环状RNA，具有更好的稳定性，可以更持续的表达蛋白，经实验验证，较之线性mRNA，蛋白表达量更高，免疫原性更低，是环状RNA研究实验体系优化，阳性对照样品的理想选择。

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细胞表达验证结果

实验方法：

96孔板中，每孔加入100 ng mRNA，采用Lipofectamine MessengerMAX转染A549细胞（5 x 10⁴ 个细胞 / 孔），孵育24小时，用荧光素酶检测试剂盒，使用带有化学发光检测模块的酶标仪检测表达量。

实验结果：

A549细胞模型上，可检测到显著的Gluc蛋白酶表达。

eSpCas9 mRNA表达增强型S. pyogenes Cas9 核酸酶，可用于开发基于CRISPR的基因与细胞疗法时，递送至细胞或体内后表达S. pyogenes Cas9核酸酶，能够减少超过10倍的脱靶效应，同时保持对靶基因强大的编辑效率。序列来源于Slaymaker et al Science. 2015 Dec 1

金斯瑞现货环状RNA，具有更好的稳定性，可以更持续的表达蛋白，经实验验证，较之线性mRNA，蛋白表达量更高，免疫原性更低，是环状RNA研究实验体系优化，阳性对照样品的理想选择。

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细胞表达验证结果

实验方法：

等摩尔的环状RNA和线性mRNA（N1-methyl-pseU修饰）通过脂质体messengerMax转染至A549细胞，采用ELISA检测eSpCas9蛋白表达量。

实验结果：

72h，环状RNA较之线性mRNA，eSpCas9蛋白表达量可高达2倍。

eGFP mRNA可以表达增强绿色荧光蛋白，开放阅读框序列源于水母(Aequorea Victoria)，激发与发射波长 (Ex/Em) 分别为488nm和507nm。常用于mRNA疗法中实验体系或递送体系的优化与验证。自扩增RNA可使用自己的RNA序列作为模板进行自我复制，在很低的剂量下达到与传统mRNA相同的蛋白表达水平，延长抗原蛋白在体内存在的时间，可能会进一步增强疫苗的效果。

金斯瑞现货eGFP saRNA可针对全序列进行5-Methylcytidine修饰，有效降低免疫原性和细胞毒性。具备Cap1结构，提升mRNA翻译效率和表达量。

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细胞表达验证结果

实验方法：

96孔板中，每孔加入100 ng mRNA，采用Lipofectamine MessengerMAX转染A549细胞（5 x 10⁴ 个细胞 / 孔），孵育24小时。

实验结果：

在HEK293T细胞和A549细胞模型上，可检测到显著的eGFP绿色荧光蛋白表达。

F-Luc mRNA 在递送至细胞或体内后，可以表达萤火虫萤光素酶(firefly luciferase)，加入 荧光素底物后，产生黄绿色荧光，检测波长为 550-570nm。常用于 mRNA 疗法中实验体 系或递送体系的优化与验证。自扩增RNA可使用自己的RNA序列作为模板进行自我复制，在很低的剂量下达到与传统mRNA相同的蛋白表达水平，延长抗原蛋白在体内存在的时间，可能会进一步增强疫苗的效果。

金斯瑞现货自扩增型FLuc mRNA可针对全序列进行5-Methylcytidine修饰，有效降低免疫原性和细胞毒性。具备Cap1结构，提升mRNA翻译效率和表达量。

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细胞表达验证结果

实验方法：

96孔板中，每孔加入100 ng mRNA，采用Lipofectamine MessengerMAX转染A549细胞（5 x 10⁴ 个细胞 / 孔），孵育24小时，用荧光素酶检测试剂盒，使用带有化学发光检测模块的酶标仪检测表达量。

实验结果：

在HEK293细胞模型上，可检测到显著的Fluc蛋白酶表达。

mCherry mRNA可以表达mCherry红色荧光蛋白，是一种从珊瑚 (Discosoma Sp. ) 中分离出来的蛋白，激发与发射波长 (Ex/Em) 分别为587nm和610nm。为避免激发与发射波长过于接近，推荐使用560nm和620nm分别作为激发与发射波长 (Ex/Em) 。自扩增RNA可使用自己的RNA序列作为模板进行自我复制，在很低的剂量下达到与传统mRNA相同的蛋白表达水平，延长抗原蛋白在体内存在的时间，可能会进一步增强疫苗的效果。

金斯瑞现货自扩增型mCherry mRNA可针对全序列进行5-Methylcytidine修饰，有效降低免疫原性和细胞毒性。具备Cap1结构，提升mRNA翻译效率和表达量。

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细胞表达验证结果

实验方法：

96孔板中，每孔加入100 ng mRNA，采用Lipofectamine MessengerMAX转染A549细胞（5 x 10⁴ 个细胞 / 孔），孵育24小时。

实验结果：

在HEK293T细胞模型上，可检测到显著的mcherry红色色荧光蛋白表达。