蛋白表达被普遍应用于不同的科学研究中。目前有四种主要的表达系统可供研究人员选择,以找到适合其特定应用的表达系统。分别是原核表达系统、杆状病毒-昆虫表达系统和哺乳动物表达系统。
目的蛋白的性质影响如何选择表达该蛋白的表达系统,根据这一标准来选择合适的蛋白表达系统很重要。这些性质包括序列和结构以及活性、功能、折叠以及翻译后修饰。翻译后修饰(包括连接蛋白化学或物理性质的功能基团,包括醋酸盐、磷酸化、各种脂类或糖基化等)对于蛋白的下游应用可能是必要的。尽管每个表达系统具有影响这些标准的不同能力,但重要的是要考虑到某些蛋白适合在一个系统中表达却对另一个系统具有毒性。金斯瑞的蛋白质表达评估服务可以通过在细菌、昆虫或哺乳动物表达系统中进行表达测试以获得合适的表达系统。
原核蛋白表达 |
+++ |
+ |
+ |
真核蛋白表达 (无翻译后修饰) |
+++ |
+++ |
+++ |
真核蛋白表达 (翻译后修饰) |
- |
++ |
+++ |
翻译后修饰、折叠 |
+ |
+++ |
+++ |
翻译后修饰、糖基化 |
- |
++ |
+++ |
翻译后修饰、磷酸化 |
- |
++ |
+++ |
周期 |
短 |
长 |
长 |
成本 |
低 |
中等 |
中等 |
产量(mg/L) |
1~5mg/L |
0.2~50mg/L |
1~3000mg/L |
推荐应用 |
抗原蛋白、标准品蛋白、功能蛋白 |
糖基化蛋白、分析实验、分泌蛋白 |
功能应用、翻译后修饰、分析实验、性质研究 |
E.coli是常用的蛋白表达系统并且蛋白表达通常是由一个DNA质粒表达载体诱导的。原核蛋白表达系统以大肠杆菌表达系统为代表,具有遗传背景清晰、成本低、表达量高的特点。如果目的蛋白的来源是原核生物,E.coli 是多数研究人员的选择。若蛋白来源于真核生物,该系统无翻译后修饰能力,选择其他表达系统会更优。但翻译后修饰对于目的蛋白不重要的情况下,E.coli 仍然是真核生物蛋白表达的良好选择。
杆状病毒-昆虫表达系统可表达不能用大肠杆菌表达的高质量的糖基化蛋白。昆虫细胞是一个相比原核系统更高级的真核系统,因此能够进行更复杂的翻译后修饰。
哺乳动物细胞与细菌相比,具有更复杂的蛋白生产能力,包括协助蛋白折叠成正确构象的机制,比如伴侣蛋白和修饰(糖基化、甲基化、磷酸化等)。
对于哺乳动物来源的蛋白,其活性不仅与一级结构(序列)有关,而且与构象和修饰有关,而其他表达系统,尤其是亲缘关系远的系统,无法实现哺乳动物细胞中天然存在的所有修饰。金斯瑞使用经过基因修饰的CHO和HEK293细胞,结合特定的表达载体,生产出高表达量、高质量的蛋白,已被数百个成功的项目所证明。
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