慢病毒滴度p24检测试剂盒

产品列表

检测原理

• 原理示意图
  

  图1：检测原理

• 检测流程图
  

  图2：检测流程图

验证数据

• 去干扰能力

  Lentivirus Titer p24 ELISA Kit Pro对游离p24的去干扰能力

  

  图3：有效减少游离p24的干扰
  将不同浓度的p24蛋白添加稀释液中，结果显示，Lentivirus Titer p24 ELISA Kit Pro (GenScript, L00974) 基本不会检测到添加到稀释液中的游离p24蛋白。

  

  图4：特异性检测慢病毒颗粒上的p24蛋白
  将不同浓度的p24蛋白添加到纯化的慢病毒样本中，结果显示，Lentivirus Titer p24 ELISA Kit Pro (GenScript, L00974)，检测到的p24蛋白浓度与实际慢病毒颗粒上p24浓度一致。

• 高准确度和回收率

  回收率用于确定分析物检测是否受样品基质差异的影响，通过将已知量的分析物加标到不同的样品基质中来验证回收率。以下是根据具有代表性的准确度验证生成的报告和数据示例，在这项验证中，使用3批次试剂盒（GenScript, L00938），将已知量的分析物加标到基质中混合验证回收率，样本重复测量3次。

  Table 1: 三批次试剂盒回收率测试结果为 86%-108%

  批次编号	重复次数	平均测值（pg/mL）	回收率
  #1	3	1945.30	86%
  #2	3	1787.64	108%
  #3	3	1752.76	90%

• 高检测精密度

  A. 批内精密度/重复性

  批内精密度验证体现测定板内每孔之间的重复性，有助于确保在测定板的不同孔中运行样本检测可以给出可靠的结果。
  以下是根据具有代表性的批内精密度验证生成的报告和数据示例，在这项验证中，使用金斯瑞p24检测试剂盒（GenScript, L00938），分别对低、中、高3个浓度水平的样本进行测试，每个样本各重复检测10次，每个样本计算10次测量浓度结果的变异系数(CV)。

  Table 2: 三批次试剂盒批内精密度验证结果

  批次编号	重复次数	平均测值（pg/mL）	%CV
  #1	10	215.55	3%
  #1	10	829.45	4%
  #1	10	1537.42	4%
  #2	10	209.60	5%
  #2	10	792.76	2%
  #2	10	1431.42	3%
  #3	10	188.09	6%
  #3	10	759.99	4%
  #3	10	1377.71	3%

  B. 批间精密度

  批间精密度体现同一样品在多批测定间的重现性，有助于确保在不同批次试剂盒中运行样本检测可以给出可靠的结果。
  以下是根据具有代表性的批间精密度验证生成的报告和数据示例，在这项验证中，使用3个不同批次试剂盒（GenScript, L00938），分别对低、中、高3个浓度水平的样本进行测试，每个样本各重复检测10次，每个样本计算30次测量浓度结果的变异系数(CV)。

  Table 3: 三批次试剂盒批间差验证结果

  批次数量	重复次数	平均测值 pg/mL	%CV
  3	3×10	204.41	7%
  3	3×10	794.07	5%
  3	3×10	1448.85	6%

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常见问题解答

• 1. 物理滴度和感染滴度有什么区别？

  病毒滴度有两种表示方式：以转导测量的功能（传染性）滴度或以病毒颗粒测量的物理滴度。物理滴度是测量样本中存在多少病毒，通常根据蛋白质（例如p24）的水平计算。功能滴度是衡量有多少病毒可以感染细胞的指标，通常比物理滴度低 100-1000 倍。

• 2. 测试中样本稀释液如何选择？

  对于Lentivirus Titer p24 ELISA Kit (GenScript, L00938)，可以使用试剂盒中稀释后的1× Wash Solution进行样本稀释，效果是相同的。
  对于Lentivirus Titer p24 ELISA Kit Pro (GenScript, L00974)，在分离游离p24阶段，可以不对慢病毒上清样本进行稀释；若稀释，则使用Cell culture medium（10% FBS）；在后续的ELISA检测阶段，可以使用试剂盒中稀释后的1× Wash Solution稀释。
  如果使用样本或制剂buffer作为标准品和样品的稀释液，需要通过预实验测试回收率是否符合预期，符合预期则可以使用，否则不建议使用。其他稀释液例如超纯水，未添加FBS的DMEM等都不能保证正常输出结果。如果您需要验证方面的支持，可以联系我们。
  对于Lentivirus Titer p24 Kit Easy (GenScript, L01019)，推荐使用 Assay Dilution Buffer（GenScript, B00062）。自行配制推荐配方为 1×PBS，10% FBS，1‰ Tween 20。

• 3. Lentivirus Titer p24 ELISA Kit Pro，Lentivirus Titer p24 ELISA Kit，Lentivirus Titer p24 Kit Easy 有什么区别？

  Lentivirus Titer p24 ELISA Kit Pro 仅会检测出慢病毒衣壳中的p24蛋白，不会检测出游离的p24蛋白，通过ELISA方法测定，全程耗时约3 h。
  Lentivirus Titer p24 ELISA Kit 检测的是总p24蛋白，包括游离的p24蛋白和慢病毒衣壳中的p24蛋白，通过ELISA方法测定，全程耗时约2.5 h。
  Lentivirus Titer p24 ELISA Kit Easy 检测的是总p24蛋白，通过化学放光法进行测定，孵育时间为15分钟，检测过程无需洗涤，全程耗时约30分钟。

• 4. 金斯瑞的慢病毒滴度p24试剂盒是否含有人源样本？

  均不含有人源材料，生物风险低。

• 5. 一个试剂盒可以检测多少个样本？

  Lentivirus Titer p24 ELISA Kit (GenScript, L00938)，Lentivirus Titer p24 ELISA Kit Pro (GenScript, L00974) 试剂盒中各配有一块预包被的96孔酶标板，其中包含8 孔 x 12 板条，我们建议按照说明书中推荐的标准曲线稀释梯度，配置8个标准品工作液。 为了确保滴度的可靠定量，建议标准品和样品均一式两份进行重复测试。由此可计算出一个试剂盒可以测试40个样本。
  Lentivirus Titer p24 Kit Easy (GenScript, L01019) 所提供的试剂可按照说明书建议的工作体积进行96次测定。如果使用384孔板进行测定，所用试剂体积可进行等比例减少，但需要进行预实验确定测定的可靠性。

• 6. Lentivirus Titer p24 Kit Easy (GenScript, L01019) 需要额外购买组份吗？

  本试剂盒中不提供检测微孔板以及分析稀释液，客户可自行选购微孔板以及配制稀释液。
  金斯瑞提供对应的产品：96-well Low Binding White Microplates & Sealers（GenScript, D00042）以及Assay Dilution Buffer（GenScript, B00062）。

• 7. Lentivirus Titer p24 Kit Easy (GenScript, L01019) 推荐使用何种检测板？不同检测板之间有什么区别？

  本品不固定检测板型号，客户可自行选择合适的检测板，以下为选择指南：
  

  • 建议优先使用不透光的白色多孔检测板检测发光信号。例如96-well Low Binding White Microplates & Sealers（GenScript, D00042）；
  • 不透光的黑色多孔检测板亦可用于本测试，信号相比于白色多孔检测板低，低约一个数量级，但不影响样品浓度的回算；
  • 底部透明但侧壁不透光的微孔板，若搭配本产品进行测试，需要在进行检测前，在微孔板底部贴一张白纸或白色封板膜以降低孔与孔之间光信号的交叉干扰；
  • 不推荐使用全透明微孔板，透明的侧壁会使相邻孔之间造成信号干扰，影响输出准确值。

• 8. 测值超出线性范围是否有效？

  无效。需要调整稀释倍数重新复测。

• 9. 测试是否会出现边缘效应？

  慢病毒滴度p24检测试剂盒均为25℃反应，不会出现边缘效应。

• 10. 使用洗板机进行测定时需要更多的洗液，是否可以提供额外的洗液试剂？

  可单独选购 20× Wash Solution (GenScript, B00063)，该洗液适用于 Lentivirus Titer p24 ELISA Kit (GenScript, L00938)，Lentivirus Titer p24 ELISA Kit Pro (GenScript, L00974) 。

• 11. 测定的读值步骤需要使用什么样的仪器？

  Lentivirus Titer p24 ELISA Kit Pro, Lentivirus Titer p24 ELISA Kit 需使用能测定 450 nm 吸光度的酶标仪。酶标仪通过检测酶标板中液体的吸光值，读取OD值后进行定性或定量分析。
  Lentivirus Titer p24 ELISA Kit Easy 需使用能进行化学发光检测的微孔板读数仪/读板机/酶标仪/分析仪。化学发光分析仪通过光电倍增管将化学发光反应（酶促发光或直接发光）产生的光信号转换为相应的信号值，用RLU（相对光单位）表示，以达到定量或定性的检测目的。

参考文献

• Sena-Esteves M, Gao G. Titration of lentivirus vectors. CSH Protocols, 2018: 281-285.
• 国家药品监督管理局，体外基因修饰系统药学研究与评价技术指导原则（试行）.2022.

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